肾活检冰冻切片免疫荧光染色（直接法）
一、目的：保证肾活检冰冻切片免疫荧光染色质量
二、责任人：特殊染色技术组人员
三、试剂
1.冰冻包埋剂OCT
2.荧光抗体：IgG-FITC(1:50),
IgA-FITC(1:40),
IgM-FITC(1:40),
C3-FITC(1:40),
C1q -FITC(1:40)•
3.PBS:PH值：7.2
4.封片甘油：防荧光淬灭封片剂，PH值：8.4
四、取材
1.准备液氨罐、冷冻架、塑料小凹、OCT
2.活检组织取出后，立即浸入塑料小凹槽中，置于液氮中速冷（10s）
3.置于恒冷切片机内立即行冰冻切片（切片厚度5um）
五、固定
1.待冰冻切片充分干燥后，立即放入纯丙酮固定（7min），干燥后低温保存
2.固定、干燥后的冰冻切片可直接染色；如若从低温冰箱中取出，需干燥后染色
六、免疫荧光染色
1.加入抗体工作液避光孵育（37℃，30-60min），或者避光孵育过夜（4℃，约16h）
2.PBS水洗（5min）
3.封片
七、注意事项
1.染色过程防止切片过干，严格避光
2.切片时防止过软，组织变形
3.丙酮需要定期更换
肾活检冰冻切片免疫荧光染色（间接法）
一、目的：保证肾活检冰冻切片免疫荧光染色质量
二、责任人：特殊染色技术组人员
三、试剂
1.冰冻包埋剂OCT
2.一抗：C4d(1:50),
HBeAg(1:200)
HBcAg (1:400)
HBsAg (1:400)
κ链、λ链 (1:100)
二抗：猪抗兔抗体-FITC、兔抗鼠抗体-FITC（1:50）
3.PBS:PH值：7.2
4.封片甘油：防荧光淬灭封片剂，PH值：8.4
四、取材
1.准备液氨罐、冷冻架、塑料小凹、OCT
2.活检组织取出后，立即浸入塑料小凹槽中，置于液氮中速冷（10s）
3.置于恒冷切片机内立即行冰冻切片（切片厚度5um）
五、染色
1.待冰冻切片充分干燥后，10%小牛血清封闭
2.去除多余液体，加入稀释后一抗，避光孵育（室温，1.5h）
3.PBS冲洗（2min）
4.加入荧光二抗，避光孵育（室温，40min），水洗
5.干燥后，荧光防淬灭甘油封片
六、注意事项
1.染色过程防止切片过干，严格避光
2.切片时防止过软，组织变形
3.乙肝染色需设置阴性对照
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